沙门氏菌病的四类综合症及胃肠炎潜伏期症状

沙门氏菌病的四类综合症及胃肠炎潜伏期症状

人沙门氏菌中有四种类型的综合征：沙门氏菌疾病；伤寒；非键型沙门氏菌败血症和无症状载体。沙门氏菌胃肠炎是由鼠伤寒沙门氏菌以外的任何类型的沙门氏菌引起的，通常表现为温和的持续性腹泻。伤寒实际上是由沙门氏菌伤寒引起的。尚未接受治疗的患者的死亡率可能超过10％，而对于接受适当治疗的患者，死亡率小于1％。幸存者可以成为慢性无症状沙门氏菌载体。这些无症状的载体仍然可以向其他携带者传播微生物而不会显示症状（传统的例子是玛丽的伤寒）。

败血症的非细类沙门氏菌可能是由各种沙门氏菌感染引起的，可能会影响所有器官，有时会导致死亡。幸存者可以成为慢性无症状沙门氏菌载体。

1。致病

沙门氏菌胃肠炎，孵育期通常为6-72小时。主要症状是恶心，呕吐，腹部痉挛，腹泻，发烧和发冷头痛。疾病的病程通常为1-2天或更长时间。感染剂量为15-20种细菌，死亡率为1-4％。最易感的群体是幼儿，弱者，老年人，免疫缺陷的人等。污染的来源主要是人类和家庭牲畜粪便，沙门氏菌经常在动物，尤其是家禽和猪中发现。它也存在于许多环境中。从水，土壤，昆虫，工厂和厨房设施以及动物粪便中发现了这种细菌。它们可以在各种食物中找到，包括生肉，家禽，乳制品和鸡蛋，鱼，虾和鸡腿，酵母，椰子，酱油，酱油和沙拉酱，蛋糕粉，奶油三明治甜点，顶部食材，顶部食材，干胶，干胶，花生露，橙汁，果汁，可可分子和巧克力和巧克力。

沙门氏菌也是一种中等细菌，在中等温度，中性pH，低盐和高水活性下生长最佳。最小生长水活性为0.94。兼性厌氧，对中等加热敏感。同样，细菌可以适应酸性环境。通过卫生控制以防止继发污染；蒸和烹饪；巴氏杀菌等。正常的家庭烹饪和个人卫生可以防止熟食的次要污染，控制时间和温度通常可以完全防止沙门氏菌疾病的发生。

2。检查

由于沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中突出了沙门氏菌的测试。沙门氏菌是食物传播病原体中最积极研究的细菌。当前的通用方法将记入5个步骤：

1。细菌 - 第一步是增加含有营养素的非选择性培养基中食品样品中的细菌，以使损坏的沙门氏菌细胞可以恢复到稳定的生理状态。

2。选择性细菌增强 - 在含有选择性抑制剂的增长培养基中，样品中进一步增强样品的一步。该培养基使沙门氏菌能够连续增殖，同时防止大多数其他细菌的增殖。

3。选择性板隔离 - 此步骤使用固体选择性培养基来抑制非甲状腺肿的生长，并识别肉眼可见的可疑沙门氏菌的纯菌落。

4。生化筛查 - 隔离大多数非核细菌。还提供了沙门氏菌培养物属的初步鉴定。

5。血清学技术提供了培养细菌物种的鉴定。

这五个步骤代表了理想的情况。但是，经验丰富的检查员可能会在一个或几个步骤中看到特征和差异。

目前，测试食品中的沙门氏菌基于统计抽样计划，而25克食品是标准分析单元。

3。从食物中制备孤立的沙门氏菌样品

以下方法是将25G样品用作检测单元，样品：肉汤的比率为1：9。除非另有说明，否则添加足够的肉汤以维持1：9的比率，具体取决于混合程度。对于不需要准确称重和测试的样品，例如青蛙腿，请参阅特定方法描述。

1.干蛋黄，干鸡蛋，干鸡蛋，液体牛奶（无脂肪牛奶，含2％脂肪牛奶，全牛奶和脱脂牛奶），粉粉（蛋糕，甜蛋糕，甜甜圈，甜甜圈，饼干和面包），婴儿食品，嘴食品，口腔食物，嘴食物或软管，食物：吃鸡蛋食品：吃鸡蛋食品：吃鸡蛋食品：

最好不要在检查前解冻冷冻样品。如果必须软化样品以获得要测试的部分，则尽快融化所需的部分，从而增加竞争细菌的数量或减少对沙门氏菌的可能损害。解冻必须低于45℃，在用自动恒温器的水浴中连续搅拌15分钟或在18小时内解冻。称重25克无菌样品，并将其放入带有螺钉盖（500毫升）或其他合适容器的宽口瓶中。对于未加粉的样品，加入225 mL灭菌乳糖肉汤。如果产品是粉状的，请加入约15毫升灭菌的乳糖肉汤，然后用灭菌的玻璃棒，勺子或灭菌舌头搅拌以形成均匀的悬浮液。添加3个乳糖肉汤10ml，10ml和190毫升的部分，以使总量225毫升。彻底搅拌，直到样品完全悬浮并且没有团块为止。紧紧盖住瓶盖，让其在室温下静置60分钟。彻底摇动并混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，请使用灭菌或1NHCL将pH调节为6.8±0.2。在确定最终pH之前，拧紧盖子并彻底混合。然后将瓶盖放松约1/4周期，并在35°C下孵育24±2小时。以下步骤以四个1-10进行。

2。鸡蛋：

A.含壳的鸡蛋：使用硬刷在水流下刷鸡蛋。将卵浸入含有0.1％磺酸钠（SDS）的氯化物溶液中30分钟。将8 ml次氯酸钠加入992 mL含1 g SDS的蒸馏水，以制备CL-/0.1％SDS溶液。这种消毒剂需要在使用前暂时准备。打开鸡蛋无菌性，使用灭菌的鸡蛋分离器，然后丢弃鸡蛋。无菌操作重25克蛋黄进入一个灭菌的500毫升锥瓶或其他合适的容器。加入225毫升胰腺节肢动量（胰腺化合物）大豆汤（TSB），然后摇动。在室温下静置60分钟。彻底摇动它，并使用测试条测量pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2，然后将其放在35°C下24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

B.液体全鸡蛋（同质）：无菌操作，将25克放置在无菌的500毫升圆锥形瓶中或其他合适的容器中。加入并彻底混合。如上所述继续。

C.煮沸的硬鸡蛋（鸡蛋，鸭蛋或其他鸡蛋）：目前，尚不清楚蛋白质中的沙门氏菌抑制剂是否具有热稳定性。因此，蛋清和蛋黄被分离出无菌性。将25克粉状蛋黄固体称为500毫升锥瓶或其他合适的容器。加入并旋转并彻底混合。如上所述继续。

3。脱脂奶粉

A.瞬时溶解：通过无菌操作称重25克样品，并将其添加到消毒的烧杯（250毫升）或其他合适的容器中。经过灭菌的玻璃或纸（用胶带滚动以进行高压棒）漏斗后，将25克的检测单元慢慢倒入灭菌的500毫升圆锥形瓶或其他合适的容器（包含225毫升的绿色绿色水）中，以覆盖绿色绿色水的表面。还可以将25G检查单元的多个部分倒入明亮绿水表面的相应部分。在每种消毒的蒸馏水中加入2ml的1％绿色溶液并配置绿色水。允许包含样品前细菌培养基的容器持续60±5分钟。无需混合或调节pH，盖上容器松散。在35°C下栽培24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

B.非固化溶解：根据上述脱脂奶粉的方法，不允许将多个检查单元组合成比例。

4。全奶粉：

无菌操作重25克样品，并将其添加到无菌的螺钉状宽口瓶（500毫升）或其他合适的容器中。加入225毫升灭菌的蒸馏水，并彻底混合。在室温下紧紧盖住60分钟。使其充分混合并用测试条测量pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。在确定最终pH之前，拧紧盖子并彻底混合。然后加入0.45 ml的1％绿色染料溶液并彻底混合。松开约1/4的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

5。酪蛋白：

通过无菌操作称重25克样品，添加到无菌同质杯中，在样品中加入225毫升无菌乳糖肉汤，并均匀均匀2分钟。无菌操作，将均质的混合物转移到带有螺钉盖或其他合适容器的500毫升宽口瓶中。紧紧盖上盖子，让室温静置60分钟。彻底摇动并混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。在确定最终pH之前，拧紧盖子并彻底混合。松开大约1/4周期的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

6。大豆面粉：

通过无菌操作称重25克样品，并将其添加到消毒的烧杯（250毫升）或其他合适的容器中。使用灭菌玻璃或纸（用胶带滚动以进行高压棒）漏斗，将25克的检测单元慢慢倒入灭菌的500毫升圆锥形瓶中或其他含有225毫升乳糖汤的适当容器，以覆盖乳糖汤的表面。测试单元（25G）不能成比例测试。容器被允许坐60±5分钟。无需混合或调节pH，盖上容器松散。在35°C下栽培24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

7。鸡蛋产品（面条，鸡蛋，通心粉，意大利面条），奶酪，面团，混合沙拉（火腿，鸡蛋，鸡肉，金枪鱼，土耳其），新鲜，冷冻或干果，蔬菜，坚果，果酱，甲壳类（虾，蟹，蟹，小cr鼠，小龙虾）：：

最好不要在检测前解冻冷冻样品。如果必须将冷冻样品变软以进行检测部分，则应在45°C的水浴中在15分钟内通过连续搅拌和自动恒温器融化。或在18小时内2＆＃0; 5°C内进行。

通过无菌操作称重25克样品，并将其添加到灭菌均匀的均质器中。加入225毫升灭菌乳糖汤并均质2分钟。然后无菌操作将均质的混合物转移到无菌螺旋盖的宽口瓶中（500毫升）或其他合适的容器。紧紧盖住瓶盖，静置60分钟。彻底摇动它，并使用测试条测量pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。混合好。松开约1/4的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤在4、1-10中继续进行。

8。干酵母：

称量25克无菌的样品，并将其放入带有螺钉盖（500毫升）或其他合适容器的宽口瓶中。加入225毫升灭菌胰腺糖苷（胰腺）大豆汤，并充分混合以使酵母形成均匀的悬浮液。紧紧盖住帽子，在室温下站立60分钟。彻底摇动它，并使用测试条测量pH值。如有必要，将pH调节至6.8±0.2，并在测量最终pH之前彻底混合。松开大约1/4旋转的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。非活性酵母，根据D，1-11执行以下步骤。活性干酵母，与培养的样品充分混合，将1 mL转移至10 ml 蛋白（LST），然后将1 mL转移至10 mL四磺酸盐（TT）肉汤。将这两种选择性肉汤在35°C下孵育24±2小时。完全旋转并混合培养的种植肉汤。每个肉汤必须用3 mM接种环路标记（IV，3和IV，4）接种，然后将接下来的四个，5＆＃0; 10。

9。糖霜和食物顶的混合物：

无菌操作重25克样品，并将其放入带有螺钉盖或其他合适容器的宽口宽瓶中。加入225毫升营养肉汤，并充分混合。紧紧盖住帽子，静置室温60分钟。彻底摇动它，并使用测试条测量pH值。如有必要，将pH调节至6.8±0.2。松开大约1/4旋转的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤以四个，1-10的速度继续进行。

10。调味料：

A.黑胡椒，白胡椒，芹菜种子或干辣椒粉，茴香，红辣椒，香菜切片，香气香气，芝麻，百里香，百里香，蔬菜切片：称量25克无菌样品，并将其放入带有螺旋盖或其他合适容器的无菌宽口瓶中。加入225毫升灭菌胰腺大豆（TSB）肉汤，搅拌均匀，拧紧盖子，并在室温下静置60分钟。旋转并充分混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH调节至6.8±0.2。松开大约1/4旋转的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤以四个，1-10的速度继续进行。

B.洋葱切片，洋葱粉，大蒜切片：重25克无菌样品，并将其放入带有螺旋帽或其他合适容器的灭菌宽瓶中。样品在含有K2SO3的TSB霞多丽大豆肉汤中预先细菌（增加5G的K2SO3以使K2SO3的最终浓度为0.5％）。将K2SO3添加到肉汤中。在500毫升圆锥形瓶中等分225毫​​升，在121°C的高压瓶中等分15分钟。灭菌后，通过无菌操作测量容量，并在必要时将其调整为225毫升。将含有K2SO3的无菌TSB加入样品中，并彻底混合。接下来，按三部分和10A部分。

C.牙买加胡椒，肉桂，丁香和薄荷：目前无法消除这四种香料的毒性。将香料稀释至无毒水平，然后进行细菌检查。在检查牙买加胡椒，肉桂和薄荷时，样品与肉汤的比率为1：100，而肉汤切成丁的肉汤比率为1：1000。检查叶状调味品。遇到脱水产物时吸收汤的实际困难以及样品与汤的比率应大于1:10。如三分之二的10a中所述检查这些调解符，以维持建议的样品与肉汤比率。

11。糖果和糖涂层（包括巧克力）：

无菌操作重25克样品，并将其放入灭菌的搅拌容器中。加入225毫升灭菌的脱脂奶粉，搅拌2分钟。然后将搅拌的混合物无菌地将带有螺钉或其他合适容器的500毫升宽口瓶中传递到灭菌的500毫升宽口瓶中。紧紧盖住帽子，静置室温60分钟。旋转并充分混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。加入0.45 ml的1％绿色染料溶液并充分混合，将瓶盖缩放1/4，然后将其培养。根据第4、1＆＃0; 10节进行以下操作。

12.椰子：

无菌操作将样品的25克重成25克，该样品带有螺钉盖或其他合适容器的灭菌500毫升宽口瓶。加入225毫升灭菌的乳糖肉汤，摇动它，拧紧盖子并在室温下坐60分钟，摇动它，使其充分混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。总共加入了2.25 mL的龙醇7号，并彻底混合。取而代之的是，已经蒸（15分钟）蒸三硝基苯二元X＆＃0300。这些表面活性剂仅限于使用最低量，因此它们只是泡沫。 x＆＃0; 100;大约2或3滴。松开大约1/4旋转的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。以下步骤以四个，1-10的速度继续进行。

13。食用染料和食用色素：

如上所述，对具有pH 6.0或以上的染料（悬浮液）进行处理（C＆＃0; 1）。以低于6.0的pH值将染料或染料沉淀，重25克无菌样品，并将其放入带有螺钉盖或其他合适容器中的无菌500毫升宽口瓶中。加入225毫升的四硫酸盐汤，没有明亮的绿色染料并充分混合。紧紧盖住帽子，让其在室温下静置60分钟，用pH值调整pH值为6.8±0.2。加入2.25 ml的0.1％绿色溶液，并彻底旋转并充分混合。松开大约1/4旋转的瓶盖后，将其放在35°C下24±2小时。接下来，按以下四个，3、10个部分。

14。明胶：

称量25克无菌样品，并将其放入带有螺钉盖或其他合适容器中的500毫升宽口瓶中。加入225毫升灭菌的乳糖汤和5％的5％明胶酶水溶液。混合，拧紧盖子，在室温下静置60分钟。旋转并充分混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。瓶盖通过旋转的1/4松动，并在35°C下孵育24±2小时。根据第4、1＆＃0; 10节进行以下操作。

15。肉，肉类替代品，肉类副产品，动物产品，腺体产品和粗粉（鱼，肉，骨头）：

无菌操作重25克样品，并将其放入灭菌器中。加入225毫升灭菌乳糖汤，搅拌2分钟。然后将搅拌的混合物转移到带有螺钉盖的500毫升宽口瓶中，或将其转移到其他合适的容器中。紧紧盖住帽子，静置室温60分钟。如果混合物是粉状，地面或压碎的，则无需搅拌。对于不需要搅拌的样品，请加入乳糖肉汤并充分混合；拧紧盖子，在室温下静置60分钟。彻底旋转并混合，并使用测试条确定pH值。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。总共添加了2.25毫升的阴离子，并充分混合。也可以通过炖三硝基硅x＆＃0; 100来代替它。控制这些表面活性剂的剂量和泡沫。实际量取决于测试材料的组成；不需要表面活性剂来分析粉末状腺产物。在用旋转的1/4松开盖后，将样品混合物在35°C下孵育24±2小时。根据第4、1＆＃0; 10节进行以下操作。

16。青蛙腿（此方法用于检查中国和国外的所有青蛙腿）：

将15对青蛙腿放入灭菌的塑料袋中，并用消毒的乳糖汤浸入它们。如果估计一条腿平均重25克或更多，则只需检查15对的一条腿即可。将袋子放入大型塑料烧杯或其他合适的容器中，在机械膨胀上振荡15分钟，然后在4厘米（1-1/2英寸）的机械振荡下振荡100次/分钟。将乳糖肉汤从袋子中倒入，然后在另一个灭菌塑料袋内。添加更多的乳糖肉汤以使总量。彻底混合，在室温下静置60分钟。如有必要，将pH值调整为6.8±0.2。然后将含乳糖汤的塑料袋放在塑料烧杯或其他合适的容器中，然后在35°C下孵育24±2小时。接下来，遵循以下四个，1＆＃0; 10个部分。

17。野兔骨骼（此方法用于中国和国外的所有野兔骨骼）：

取3个野兔骨骼并将其放入消毒的塑料袋中，将其浸泡在九厘米（1-1/2英寸）的机械振荡器中，将袋子浸入灭菌的乳糖汤中（请参阅A，A，23＆＃25节），将袋子放入大型塑料烧杯或其他合适的容器中，并在4厘米（1-1/2英寸）上振动15分钟。将乳糖肉汤中的混合物倒入袋子中，并在总量中添加更多的乳糖肉汤。彻底混合，在室温下静置60分钟。如有必要，请使用pH测试将它们设置为6.8±0.2，并在35°C下孵育24±2小时。接下来，遵循以下四个，1＆＃0; 10个部分。

18。口香糖：

无菌操作将样品的25克重成25克（250毫升）或其他合适的容器。准备过过滤和灭菌的1.0％纤维素酶溶液（将1 g纤维素酶加入99毫升无菌水），过滤并用0.45 um膜对其进行灭菌，然后将其放入150 mL瓶中。 （纤维素酶溶液可以在2·-5℃下储存长达2周）。在500 mL无菌宽口瓶中加入225毫升无菌乳糖汤和2.25 mL无菌1％纤维素酶溶液，该瓶带有螺钉盖或其他合适的容器。当用磁性搅拌器剧烈搅拌酶/乳房混合物时，迅速倒入25克的样品，以通过无菌玻璃漏斗进行检查。旋转盖，让其在室温下静置60分钟，而无需调整pH值。松开瓶盖并在35°C下孵育24±2小时。遵循以下四个。

iv。隔离沙门氏菌

1。拧紧帽子，轻轻摇动培养的样品混合物。

新鲜食物，严重污染的食物和动物饲料：

将0.1 mL的混合物转移到（RV）肉汤中，并将1 mL的混合物转移到10 mL四硫酸盐汤（TT）中。

其他食物：

将1 ml的混合物转移到10 mL的硒酸酯肉汤（SC）中，并将1 ml的混合物转移到10 mL四硫酸盐汤（TT）中。

2。在以下步骤中进行选择性细菌增强：

新鲜食物，严重污染的食物和动物饲料：

将RV培养基在42±0.2°C（水溶性）中孵育24±2小时。将TT汤在43±0.2°C（水溶性）下孵育24±2小时。

其他食物：

将SC和TT汤在35°C下孵育24±2小时。

3。均匀混合（如果是试管，将其混合在涡旋中），将TT肉汤与直径3mm接种环的接种肉汤，并在二硫酸盐（BS）琼脂上，木糖酶赖氨酸脱氧胆酸（XLD）琼脂酰胺（XLD）琼脂和肌发育细菌（HE）琼脂层（HE）琼脂层（HE）琼脂层。在标记接种前一天，准备BS琼脂板并在深色室温下储存。

4。使用直径3mm的接种环从RV培养基中取一个完整的环（10μl）（样品是新鲜食物，严重污染的食物和动物饲料）和SC汤（除新鲜食品以外的其他样品，严重污染的食物和动物饲料），并将其接种在上面的板块上。

5。将选择性板放在35°C下24±2小时。

6。检查板中可疑的沙门氏菌菌落的存在。

典型的沙门氏菌菌落形态：

培养24±2小时后，从每个选择性板中挑选了两个或多个菌落。典型的沙门氏菌菌落如下：

A.在肠道（HE）琼脂上。

菌落是蓝绿色的蓝色，有或没有黑色中心。许多沙门氏菌培养物可以呈现出大型光泽的黑色中心或几乎所有黑色殖民地。

B.木糖赖氨酸脱氧胆酸（XLD）琼脂。

有或没有黑色中心的粉红色殖民地。许多沙门氏菌培养物可以具有几乎全黑的巨大光泽黑色中心或殖民地。

C.关于二硫酸苯亚硫酸盐（BS）琼脂。

它是棕色，灰色或黑色的，有时具有金属光泽。殖民地周围的介质通常开始变成棕色，但随着培养时间的延长而变成黑色，并具有所谓的光环效应。

如果培养24±2小时后，典型的菌落出现在BS琼脂上，则选择2个或更多典型的菌落。无论在24±2小时的培养过程中是否捡起BS琼脂平板，BS板均培养24±2小时。在培养48±2小时后，如果典型的细菌出现在BS板上，则选择了2个或更多菌群。如果仅在24±2小时后才在培养的BS板上挑选菌落，并在三糖铁琼脂（TSI）和赖氨酸琼脂（LIA）上接种菌落，则将存在非典型反应，因此培养物中认为沙门氏菌不存在。有关TSI和LIA反应的详细说明，请参见下面的第4.8和4.9节。

非典型沙门氏菌菌落形态：

如果没有典型或怀疑的沙门氏菌菌落，请检查非典型沙门氏菌菌落。

A，他和XLD琼脂：

非典型沙门氏菌是He和XLD琼脂的黄色殖民地，有或没有黑色中心。培养24±2小时后，没有典型的沙门氏菌菌落，选择了2个或更多非典型沙门氏菌菌落。

B. BS琼脂：

一些非典型菌株会产生绿色菌落，周围的培养基略微或非黑暗。如果在24±2小时的BS板培养后没有出现典型的菌落，则不会采摘菌落，并且将允许板继续培养24±2小时。如果在培养48±2小时后没有出现典型或可疑的菌落，则选择两个或更多非典型菌落。

7。使用经过灭菌的针头轻轻接触每个菌落的中心，接种TSI斜坡，首先标记倾斜的表面，然后刺穿底层。不燃烧接种针，您可以接种LIA的倾斜度。首先穿刺接种层两次，然后标记倾斜度。由于赖氨酸脱羧反应需要严格的厌氧条件，因此LIA斜率必须具有深底层（4厘米）。在5＆＃0; 8°C下以选定菌落的方式存储选择性板。

8。TSI和LIA琼脂斜率分别在35°C下孵育24±2小时。放松测试管盖以在倾斜培养物时保持有氧条件，以防止过度的H2。

在TSI琼脂中，典型的沙门氏菌培养物使坡度碱（红色）和底层酸性（黄色）产生或不产生H2S（琼脂变成黑色）。在LIA琼脂中，典型的沙门氏菌培养物在试管底部有碱性（紫色）反应。只有当测试管的底层显然是黄色时，才认为它是酸性（负）反应。不要排除试管底层产生的褪色反应。在LIA，大多数沙门氏菌培养物产生H2；一些非核培养物会产生砖红色反应。

9.所有对碱性琼脂碱反应的培养物，无论其对TSI琼脂的反应如何，都应保留为可疑沙门氏菌分离株，并进行进一步的生化和血清学检查。 LIA酸性的培养物被认为是可疑的沙门氏菌分离株，应进行进一步的生化和血清学检查。在LIA中具有酸性底层和TSI酸性底层的培养物可以被视为非核培养物并被丢弃。保留的拟议阳性Tis琼脂培养可以根据以下四个和10个部分进行测试，以查看包括沙门氏菌在内的沙门氏菌。如果TSI中的培养物没有显示沙门氏菌（倾斜碱性，底部酸性）的典型反应，则可以从不可预测的选择板中挑选出可疑的菌落，如上所述4和7所述。

10。生化和血清学鉴定测试：

对从硒酸半胱氨酸肉汤分离的选择性琼脂平板（或相应食物的RV培养基）和3种制备的阳性TSI琼脂培养物在选择性琼脂板上从硒酸盐凝结剂分离（或相应食物的RV培养基），用于生物化学和验证学识别。

b如果未从一组选择性琼脂平板中分离出3个提出的阳性TSI琼脂培养物，则对其他孤立的拟议阳性TSI琼脂培养物进行了生化和血清学鉴定测试。对于分析的每个25G样本，应至少检查6种TSI培养物。

V.沙门氏菌的识别：

1。混合文化：

对于具有混合细菌的TSI琼脂培养物，应在（MC）琼脂中接种所有TSI琼脂，He琼脂或木糖赖氨酸脱氧胆酸（XLD）琼脂，并在35°C培养24±2小时。检查怀疑的沙门氏菌是否存在于板上。

一个。在（MC）琼脂上：

典型的菌落是透明的，无色的，有时具有黑暗的中心。沙门氏菌菌落有时会使培养基中其他细菌引起的胆汁盐沉淀区域透明。

b。在肠道（HE）琼脂上：请参见上面的四个，6a。

c。在木糖赖氨酸脱氧胆酸（XLD）琼脂上：请参见上述四个，6B。

转化至少2个可疑的沙门氏菌菌落在上述四个和六个部分中沉积在TSI琼脂和LIA琼脂的斜率上，然后根据上述四个和八个部分进行鉴定。

2。纯文化：

一个。尿素分析（例程）。从每个提出的阳性TSI琼脂锥培养物中，将生长与每个尿素肉汤试管中分别接种。有时，未接种的尿素汤管会变成紫红（测试阳性），因此应将未接种的肉体管作为对照包括并在35°C培养24±2小时。

b。可选的尿素酶测定（快速方法）。用直径3 mm接种环，并从每个提出的阳性TSI琼脂斜率培养中取2个环，并转移到快速的尿素肉汤中，并在37±0.5°C的水浴中培养2小时。所有具有积极结果的培养物均被丢弃，所有负面反应（中值都不崩溃）均保留了进一步的研究和实验。

3。血清学多价鞭毛（H）测试：

一个。如下第4节所述，可以目前或更晚进行多价鞭毛（H）测试。接种每个尿酶阴性TSI琼脂斜率培养以下任何一个：1）脑心脏输注肉汤，在35°C下培养46小时，直到出现可见生长（对于一天的测试），或2）胰腺节肢动物汤，在35°C下培养24±2小时（用于下一天的测试）。在每种5 ml肉汤培养物中加入2.5 mL甲醛正常盐水溶液。

b。选择两种甲醛处理的肉汤培养物多价鞭毛（H）抗血清测试。 In a 10×75mm or 13×100mm test tube, add 0.5 mL of (H) , and then add 0.5 mL of the to be for the test. The was mixed with 0.5 mL of and 0.5 mL of to make a . The was in a water bath of 4850°C, and the were every 15 , and the final were read in 1 hour.

: in the broth with serum , while in the broth with the tube ( tube).

: No in broth with serum (test ) and no in tubes.

: in both the test and the tube. For with such , are with ""'s .

4. - test:

一个。 broth. If the LIA test is , no test is . If the a LIA , the final of is with broth. A small of - TSI agar bevel was into a broth tube. The test tube cap was and at 35°C for 48±2 hours, and at least every 24 hours. is , so the . The made the . If the fades (ie, it is nor ), add a few drops of 0.2% , and then the of the test tube.

b。 red broth or broth basic 0.5% . A small of was taken from TSI agar and into broth tubes. Relax the test tube cap. The was after 24 hours of at 35°C. Most , which that gas in the tube and the acid (). Acid is a . The is that there is no gas in the tube. The was red (with red ) or (with ).

c。 (or ) broth. A small of TSI agar was into a broth tube, and at 35°C for 24 ± 2 hours, and the test was as .

1) (KCN) broth.

3mm rings from the 24-h and them into the KCN broth tube. Heat the tube mouth so that the wax seal is good when . was out at 35°C for 48±2 hours, but the was after 24 hours. Those with (with ) are . Most grow in this , that is, there is no .

2) broth:

the broth with a 3mm ring and it to a broth tube. Since broth blue ( ), broth be used as a . The was 35°C for 48±2 hours, but the was after 24 hours of . Most are in this broth (green or non-).

3) test:

broth into an empty test tube and add 0.2-0.'s , and most are (no deep red on the of the broth). And the type of in and pink as ± .

4) (H) test:

If there is no (H) test or -the (H) test, you can one.

5) Non- that are for test and for (H) test; or KCN test and for test are .

5. (O) test. ( with known with all ).

一个。 (O) test:

Use a to mark 2 areas about 1×2cm on the of each glass or plate (15×100mm). can be used, from the 24- or , blood agar base (free of blood) with 2mL of 0.85% , and the can be with a 3mm loop. Add 1 drop of to the upper part of each area with a . Add 1 drop of to the lower part of this area. Add 1 drop of (O) to area. Then mix the in one area with with a clean ring or . Mix and in area. Move the back and forth for 1 min and a dark under good , any of is a . The of (O) tests are as :

: The was for , but not in the .

: The was and did not in .

: Both the test and the are and and tests are as in the of the in Ewing.

b。 (O) group test

If there are of (O) , Vi, of (O) , the test is as five and 5a above. For to Vi , refer to 967.28B of the for of these . that with (O) group will be as for the (O) group; those who with (O) group will be as for the (O) group test.

6. tests

to the 1-11 tests in Table 1, was on the that . If one TSI in the 25g is as , no test is for the other TSI of the 25g . If the (H) test that there is a but does not have , the be ( to five and 1 above), and the be again to five and 2 above.

The tests were on the items 1-11 in Table 1 to which the that did not show a were as non-.

一个。 red broth or broth.

1)从每个尚未分类的24-琼脂斜面上挑取少许培养物，接种到肉汤管中，35℃培养48±2h。并在24h后开始观察变化。

阳性反应：产酸（黄色）和在倒立发酵管内产气。只要产酸就视为阳性反应。大多数沙门氏菌为阴性结果。即在倒立发酵管内没有气体形成，和整个培养基呈红色（含酚红指示剂）或紫色（含溴甲酚紫指示剂）。

2)除培养物在TSI琼脂斜面上产酸和在LIA中呈阳性反应，或丙二酸盐肉汤试验呈阳性的培养物外，弃去乳糖试验阳性的非沙门氏菌培养物。为了证明他们是否为亚利桑那菌，需对这些培养物作进一步试验。

b、酚红蔗糖肉汤或紫色蔗糖肉汤。

按上述五,6a-1所叙述的程序进行，除那些培养物在TSI琼脂斜面上产酸和在LIA中呈阳性反应者外，呈蔗糖试验阳性结果者皆作为非沙门氏菌弃去。

c、MR-VP肉汤。

对每个未分类的TSI琼脂斜面上可疑沙门氏菌培养物，挑取少许，接种到此肉汤管中，置于35℃培养48±2h。

1)在室温下按下述进行Voges-氏(VP)试验：

移取培养物于试管中，并将剩余的MR-VP肉汤于35℃再培养48h。加入0.6mLα-萘酚溶液于试管中并振摇；加40%KOH溶液0.2mL，并振摇。为了加快反应速度，加少许肌酸结晶。4h后观察结果：阳性反应为整个培养基由粉红色转变至红宝石色。绝大多数沙门氏菌VP试验阴性，即整个肉汤不呈粉红至红色变化。

2)甲基红试验：

吸取经96h培养的MR-VP肉汤5mL于试管中，加入5-6滴甲基红指示剂，立即观察结果。绝大多数沙门氏菌培养物呈阳性结果，即培养基呈弥散性红色。明显的黄色为阴性结果。对KCN阳性，VP试验阳性及甲基红试验为阴性培养物，皆可作为非沙门氏菌弃去。

d、氏枸橼酸盐琼脂：

从未分类的TSI琼脂斜面上，用接种针沾取培养物，划线接种于枸橼酸盐琼脂斜面上，并穿刺底层。置于35℃培养96±2h，按下述方法读取结果。

阳性反应：能生长，通常伴随颜色由绿色变兰色。大多数沙门氏菌培养物为枸橼酸盐阳性。

阴性反应：不生长或微弱生长，而且不变色。

7、培养物的分类：

沙门氏菌培养物应具有表1反应模式。凡培养物具有表2所列任何一小项结果，为非沙门氏菌则弃去。对任何培养物，当不能按表1的分类表，明确地鉴定为非沙门氏菌属，或也不能根据表2所列试验反应从沙门氏菌属中排除者，可按和氏的“肠杆菌科鉴定”所述的补充试验进一步分类。

如2个TSI培养物皆不能按生化试验证实分离物为沙门氏菌时，则对同一个25g检验样品中保留的尿素酶阴性TSI培养物，按五，4开始进行生化学试验。

8、沙门氏菌属的拟定性鉴定。

使用5种商品化的生物化学试剂盒（API 20E, II, aceae II, MICRO-ID,或Vitek GNI）中任一种，代替常规的生化管系统，鉴定拟定食源性沙门氏菌属。按本节鉴定所述，检验人员根据自己试验室选择商品试剂盒与生化管系统相适应的一种商品试剂盒。生化学商品试剂盒不能用来代替血清学试验（1）。组装试剂盒，配制试剂盒所需试剂。参照官方分析方法的978.24部分（API-20E, II和II）,989.12部分（MICRO-ID）,和991.13部分（Vitek GNI）,接种于每个组合，并按规定的时间与温度进行培养。加试剂，观察与记录结果。参照上述Ref.1把培养物拟定为沙门氏菌或非沙门氏菌属。

为证实拟定为沙门氏菌的培养物，尚需进行沙门氏菌菌体（O）血清学试验，按上述五，5；和沙门氏菌鞭毛（H）血清试验，按上述五，3；或进行-氏鞭毛（H）试验。并按下列原则对培养物进行分类：

a、用商品化试剂盒拟定为沙门氏菌的培养物，若沙门氏菌菌体（O）血清学试验阳性与沙门氏菌鞭毛（H）血清学试验阳性的则报告为沙门氏菌。

b、用商品化试剂盒确定为非沙门氏菌的培养物，参照AOAC标准（1）确定亦为非沙门氏菌，应作非沙门氏菌予以排除。

c、凡不符合a或b的培养物，应按上述五,2-6项中有关规定作进一步试验，或按Ewing(2)氏的有关项目进一步试验，或送至标准定型实验室，做最后的血清定型与鉴定。

9、鞭毛（H）试验阴性培养物的处理：

对一些生化反应典型，被认为是沙门氏菌，但鞭毛（H）试验阴性的培养物，可能是无动力的菌株，或鞭毛抗原发育不充分，对此培养物的动力测定方法如下：

从TSI斜面上挑取少量的培养物，接种于动力试验培养基平板中，在距平板边缘10mm处一次穿刺2-3mm深，不要刺到平板底或接种到其他任何部位。置于35℃培养24h。如果细菌游散生长至40mm或更远，按下述方法再试验：在游散生长最远处，用3mm接种环转种一环培养物至胰酪胨大豆蛋白胨肉汤中。重复沙门氏菌多价鞭毛（H）（按上述五，3）或作-氏鞭毛（H）血清学试验。如果培养物经第一个24h培养后无动力，于35℃培养24h；如果仍无动力，则置25℃再培养5天。如果上述试验仍为阴性，把该培养物定为无动力菌株。如果鞭毛（H）阴性培养物，按生化学反应可疑为沙门氏菌，应将培养物呈送微生物学实验室作进一步的鉴定和/或血清学分型。递送血清学定型培养物，除非另有说明，每个检验样品要递送两个分离物。培养物要放在脑心浸液琼脂斜面的试管内递送。试管的螺旋帽应拧紧以确保安全。

六、控制：

严格执行食品生产良好操作程序，注意灭蝇，加强对饮水、食品等的卫生监督管理，以切断传染途径。对食品加工和饮食服务人员定期进行健康检查，及时发现带菌者并给以治疗或调离工作岗位。加强屠宰业的卫生监督及各种食品特别是肉类运输、加工、冷藏等方面的卫生措施，防止沙门氏菌污染。

在食品加工过程中，必须严格按卫生规范防止二次污染，通过蒸煮、巴氏消毒、存放适宜温度等进行控制，都能防止沙门氏菌病的发生。