江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒感染情况及C株与Bartha-K61疫苗免疫防控效果比较研究

江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒感染情况及C株与Bartha-K61疫苗免疫防控效果比较研究

概括

为了控制大型养猪场中伪造的野生病毒的感染及其流行趋势，比较了突变猪伪伪造疫苗（C株C）和-K61疫苗的免疫预防和控制作用。从2017年5月到2019年1月，对江苏的59个大型田地进行了采样，间接ELISA检测到了猪群中的GE抗体，以确定猪牛群是否感染了假性野生病毒。此外，在具有假养猪场阳性的大规模猪场中，对突变猪伪疫苗（C株）和-K61疫苗的预防和控制作用进行了实验。通过检测猪伪标记，GB抗体和中和抗体来确定猪群中的猪伪标记水平。结果表明，在测试的4,608个血液样本中，有1,681 GE阳性，正率为36％，播种牛群的正率为46％，肥大的猪牛群正阳性为28％，而在肥胖期期间有22个具有GE阳性的猪农场为37％。

在其中一个商业猪群中，对两组猪伪疫苗进行了伪造疫苗的实验。通过实验，两组商用猪抗体抗体为18周，直到被宰杀。同时，发现经典和突变菌株的突变体疫苗（C菌株）的中和抗体滴度高于-K61疫苗的中和抗体滴度。结果表明，江苏中猪中伪标的感染的压力相对较高，并且C疫苗的免疫效果比该领域的进口-K61疫苗具有更好的免疫作用。

关键字

猪伪标；流行病学研究；免疫作用；中和抗体

伪标记是一种由伪标记病毒感染引起的急性和热感染疾病，该病毒感染与各种家畜和野生动物共同感染。除猪以外的所有动物都是致命的传染性。猪是伪造病毒的唯一天然宿主。在1970年代，我的国家从哈尔滨兽医研究所引入了匈牙利的伪造疫苗-K61菌株。自1990年代以来，基因缺陷疫苗被广泛用于大规模的家用猪场，这使得猪得以得到很好的控制。然而，在2011年之后，由假拟南芥病毒突变菌株引起的伪标记疾病在我的国家爆发，导致大量母猪育种疾病，新生儿哺乳猪的100％死亡率，新生儿乳猪的死亡率100％，以及在肥大猪中造成巨大的经济损失，对我国家的猪养猪行业造成了巨大的经济损失。

该实验使用间接ELISA检测猪群中的GE抗体，以确定猪牛是否感染了假性野生病毒。在猪假性田地检测到GB抗体，以确定猪群中的猪假抗体保护水平。因此，对江苏中伪标的流行状况进行了系统的研究和分析，与具有最高抗原含量最高的进口产品相比，假猪农场的伪造阳性猪农场试图使用最新的销售活疫苗来控制猪伪型的效果。通过检测猪假抗体，GB抗体和中和抗体，评估了伪标的控制效果，为进一步进行全面的预防和控制猪伪分子和假性纯化的基础奠定了基础。

1种材料和方法

1.1样品源

总共测试了4,608种血清样品，并从2017年5月到2019年1月收集了江苏的59个大型养猪场。其中，有1,521种育种猪牛群样本，1,9种猪群，以及896种为猪饲料和290个猪的样品，饲养的猪饲养员，饲养猪饲料的样本，是饲养猪的样本。 分别。

1.2试剂和仪器

Pig GE抗体ELISA试剂盒（西班牙HIPRA）和PIG伪标记GB抗体检测试剂盒（荷兰）均购自北京 Co.，Ltd。移液器，微板读取器，生化孵化器，平板洗衣机，TGL-16G高速台式离心机，二氧化碳孵化器，涡流振荡器；伪曲线变体YB-1，伪标记经典菌株HB-G，ST细胞由 Co.，Ltd.保留。这两种疫苗都是商业疫苗。 A组疫苗是进口产物，菌株是Barth-K61菌株，批次数。 B组疫苗是一种国内隔离的双基因缺失菌株C，由一家公司在批处理号的公司生产。

1.3疫苗免疫

从2018年7月到2019年1月，在江苏省的一个母猪农场进行了疫苗免疫实验。该农场在这项流行病学研究中被认为是伪造的积极积极农场。该实验分为A组和B组。免疫程序是新生小猪的1次鼻滴，1个肌肉内注射10周龄，14周龄大，并且18周大。 408件是A组，435件是B组。

1.4 ELISA和中和抗体检测

这两个实验组在4周大，6周大，10周大，14周大，18周大，20周大和24周大的4周大时收集了血液。分离血清ELISA以检测GE和GB抗体，并在两组14周龄和18周大的两组中测试了血清中和抗体。

1.5伪标记病毒滴度（）的测定

将ST细胞培养成单层后，将细胞培养基丢弃。将收获的病毒样品以10倍稀释比的连续比为10-9稀释至10-9，并将不同稀释液的毒液添加到96孔细胞培养板中。每个浓度以每孔100μl进行8个重复井。吸附1小时后，添加维护溶液；培养96小时后，观察到细胞质病（CPE），记录每个稀释时的CPE数量，并根据REED方法计算计算。

1.6中和抗体测定法

稀释病毒溶液备用使用；采用新的96孔细胞培养板作为稀释板，加入200μl血清样品（血清稀释1：2）孔，为每个孔中加入100μLDMEM溶液，将100μl的毒液从A1井中取100μl毒液，然后将其混合，然后将100μL的混合溶液加到A3中，然后将其稀释至10th孔，并根据以上方法稀释。其余两个井被设置为病毒控制井和阴性对照井。在每个血清稀释孔和病毒对照孔中加入100μL病毒溶液，并在阴性对照孔中加入100μLDMEM溶液，并在37°C下孵育1小时。带有ST细胞的96孔板被丢弃，并将稀释板上的液体转移到细胞板上。培养96小时后，观察CPE，并将最高稀释的CPE用作中和抗体滴度。进行了另一个回归实验，并将病毒稀释1、10、100和1000次。将稀释的病毒溶液添加到细胞板中，每孔100μl，每次稀释的6个重复孔。建立了6孔，仅添加DMEM。如果100倍稀释毒井的一半显示CPE，则建立了实验。

2结果

2.1猪中假抗体的GE抗体测试

从2017年5月到2019年1月，从江苏地区的59个大型农场进行了抽样和测试，随机检查了4,608个样品，其中有1,681种GE抗体的阳性样品，总体阳性率达到36％。进行了进一步的分析，在1,396种母猪样本中，有642个是阳性的，在125个公猪样品中的GE抗体阳性中有62个，繁殖猪群的阳性速率接近50％，896个肥大的猪牛样品大于120天的GE和252个阳性的GE和28％的GE阳性（均为252个阳性）。江苏中的假拟南芥感染更为严重，繁殖猪群的感染率高于商业猪群。这些养猪场都是用猪假疫苗免疫的养猪场，但他们无法很好地控制假性病毒的感染。

根据第9版的“猪疾病”，猪中伪标的母体抗体为4个月。由于母猪被感染了生命，因此母猪和小猪的GE抗体不能完全代表猪场中的伪拟南芥的感染。为了准确评估伪造中伪造的控制效果，我们进一步分析了每个猪场中商业猪的GE抗体。人们发现，对于每个养猪场，猪农场中猪的伪造感染是根据母猪牛群的阳性以及商业猪的阳性是否为正的，并且发现养猪场中的农场比例为37％（见表2）。此外，检测并分析了该地区8头猪的伪标记的GE BB抗体情况。总GB的正率为74％。主要的问题是，在猪阶段的通过率仅为62％（见表3），这是主要的免疫漏洞。

2.2在预防伪标的和控制猪之前，调整免疫程序

在对猪伪标的伪虫的流行病学调查中，我们与江苏的大型养猪场所有者进行了交流，并展示了强烈控制该农场中伪标的问题的想法。基于此，制定了农场的猪伪标和控制计划。该农场先前使用国内生产的猪伪疫苗疫苗来解决农场中的伪标的问题。 SOW群测试率GE抗体的正率为95％，商用猪伪标准中的伪标的正率为100％（见表4）。在实验之前进行了母体抗体调查（见表5）。在出生后24小时，10周龄，14周龄和18周龄的情况下，将伪伪拟核酸的假拟曲线的免疫程序调整为3次注射。

2.3评估猪中伪分析的实验结果

该实验始于2018年7月26日。两组分别接受了A疫苗和B疫苗，分别在4周龄，6周龄，10周龄，14周龄，18周龄，20周龄，20周龄和24周龄的情况下收集血液。最后一次血液收集是2019年1月15日。分别收集了测试的GE和GB抗体。两组中的GE抗体在18周龄后为阴性，表明小猪的阳性GE抗体均为母体抗体，并且在没有感染的情况下产生，并且在18周龄后GB抗体的正速率为100％（见表6）。目前，GB抗体是疫苗免疫，表明该疫苗具有更好的保护，与以前的猪假拟南芥相比，该疫苗得到了更好的控制。

2.4中和抗体检测结果

中和抗体是判断猪中伪疫苗免疫效应的黄金标准，但是测试中和抗体的测试既耗时又费力，并且不适合大规模测试。在该实验中，对中和抗体进行了第一次疫苗接种后4周，在第二次空位后4周测试。测试结果表明，在第二个空缺后4周，B组比A组好（见表7）。

3个讨论

随着猪病毒突变菌株在猪中的出现，传统疫苗的保护效率下降了。全国各地的流行病学调查发现，自2011年以来，猪群中的伪虫病毒抗体的比例已大大增加，并且从所有区域中分离出了伪比病毒突变菌株。对江苏省大规模猪场中GE抗体的一项调查发现，样品的总体GE阳性率达到36％，其中繁殖猪群的GE阳性率达到50％。与全国平均水平相比，江苏省猪感染的伪标的压力相对较高。

一旦猪感染了假性病毒，它就可以携带该病毒终身，而小猪的母体抗体的半衰期为18天，而母体抗体可以持续长达4个月。因此，对于已经是Ge阳性父养猪场的母猪牛群，有效预防和控制并正确评估伪造的预防和控制效果尤为重要。有必要在120天后检测商用猪牛群中的伪造抗体状态。这项调查还了解了在各种养猪场中肥大猪群的GE抗体情况。在总肥大猪群中，肥大的猪群阳性GE抗体的比例达到28％，在后期的肥大阶段，猪牛群阳性GE抗体的比例达到37％。对江苏地区养猪场的血清调查表明，即使对猪伪标记疫苗进行了免疫接种，肥大猪群的预防和控制效果仍然没有乐观。

在GE抗体阴性的情况下，GB免疫抗体的阳性速率与抗体的滴度相关。 GB-ELISA抗体水平可用于评估猪对当前普遍PRV菌株的相对免疫保护。在江苏的8个地理阴性猪场中，我们发现肥大猪阶段的GB抗体的正速率为62％，S/P值相对较低，这表明肥大阶段是预防和控制猪和需要注意的预防和控制的主要弱环节。

伪酸病毒C菌株C是一种新分离的假拟南芥病毒变体菌株。它的同源性与假子病毒-K61的同源性为95％至96％，与PRV-K61的菌株不同。中和抗体检测是评估免疫作用的金标准。 GB抗体只是一种中和抗体的一种类型。通常认为，如果中和抗体大于1：2，则相应的GB抗体水平为阳性。 ELISA检测到的GB抗体的S/P值与中和抗体有关。为了更好地评估疫苗农场使用的有效性，可以根据检测GB抗体进一步测试中和抗体。

我们对具有伪标记的养猪场中两组疫苗的预防和控制作用进行了评估。在相同的免疫程序下，在杀伤之前，两组在肥大期18周后一直对GE抗体负阴性。 GB抗体的阳性速率为100％，达到了良好的控制效果。此外，在第二次消除后第一次消除4周后，发现B组的中和抗体滴度比第二次消除后A组的中和抗体滴度更好，无论是经典菌株还是突变菌株，差异很明显。中和抗体的滴度越高，对病毒的中和效应越好。对于猪伪阳性养猪场，当充分了解猪群的感染状况和孕产妇抗体的减少时，选择高质量的疫苗来进行科学免疫可以产生更高的中和中和抗体，从而实现更好的伪行为为进一步的纯化猪猪提供了基础。